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型號:192-0025,192-0100,192-025

病毒檢測Kit (RT-qPCR法)

描述:病毒檢測Kit (RT-qPCR法))(英文名:ConviFlex RT-Taq Mix)用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子,特別適合檢測病毒等此類(lèi)病毒。

  • 廠(chǎng)商性質(zhì)

    代理商
  • 更新時(shí)間

    2024-05-17
  • 訪(fǎng)問(wèn)量

    1317

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病毒檢測Kit  (RT-qPCR法)

ConviFlex™ RT-Taq Mix


品名

貨號

規格

存儲

病毒檢測Kit(RT-qPCR法)

英文名:ConviFlex™ RT-Taq Mix

品牌:德國MBMinerva Biolabs

192-0025

192-0100

192-0250

25/

100/

250/

2-8°C

凍干粉復溶后在

≤-18°C保存



一、產(chǎn)品用途:
病毒檢測Kit  (RT-qPCR法))(英文名:ConviFlex RT-Taq Mix)用于定性檢測和分析RNA病毒和RNA分子,特別適合檢測等此類(lèi)病毒。

二、產(chǎn)品描述:
1. 該試劑盒為實(shí)時(shí)定量qPCR(RT-qPCR)RNA病毒檢測試劑盒。

2. 試劑盒由兩種組分組成:

組分1.

ConviFlex™ RT-Taq Mix

(凍干粉,紅蓋)

組分2.

Rehydration Buffer

(復溶緩沖液,1.5ml/管,藍蓋)

規格

貨號

1管

1管

25/盒

192-0025

4

1

100/盒

192-0100

10管

2

250/盒

192-0250


組分1.  ConviFlex™ RT-Taq Mix的凍干粉包含:MuLV逆轉錄酶、Taq聚合酶及dNTP。
其中MuLV逆轉錄酶,來(lái)自小鼠白血病病毒(M-MuLV)并經(jīng)過(guò)基因修飾。
這里的Taq聚合酶另兼具熱啟動(dòng)功能。
此Taq酶在室溫下,活性被抗體所抑制,當溫度達到70°C以上時(shí),才會(huì )被*激活。
在70°C 以下時(shí),由于Taq酶沒(méi)有*活化,因此實(shí)驗不會(huì )產(chǎn)生非特異性PCR產(chǎn)物和引物二聚體。熱啟動(dòng)Taq酶的使用可使PCR具有更高的特異性和靈敏度。

3. 試劑盒使用時(shí),先用復溶緩沖液溶解凍干粉,再加入自備的RNA模板和引物。
推薦使用MB公司提供的引物/探針(英文名:SARS-CoV-2 Confirm,
貨號271-2100)

4. 該試劑盒適合大多數RT-qPCR體系和qPCR儀類(lèi)型。關(guān)于實(shí)驗使用的最佳體積、濃度、溫度和孵育時(shí)間,本文有相應的建議,但實(shí)驗室仍可依據自己的分析要求作相應調整。

三、產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 凍干粉為逆轉錄酶和Taq酶的預混液,將RNA逆轉錄與qPCR擴增兩個(gè)過(guò)程合并,一步完成,減少移液次數、避免交叉污染、操作簡(jiǎn)單,節約時(shí)間。
2. Taq酶具有70°C熱啟動(dòng)功能,顯著(zhù)提高試劑盒的特異性和敏感度。
3. 主要組分為凍干粉,4℃保存,儲存運輸方便,性能穩定。

四、需用戶(hù)自己準備的試劑耗材和儀器:


1. 引物、探針(可選)
推薦MB公司提供的引物/探針(英文名:SARS-CoV-2 Confirm,
貨號271-2100)
2. 熒光定量PCR儀(qPCR儀)
3. 無(wú)DNase和RNase的qPCR反應管
4. 離心機
5. 移液器及帶濾芯吸頭(不含DNase和RNase)
6. 用戶(hù)自己的樣品。

五、樣本制備說(shuō)明:
1. 來(lái)自于真核細胞、原核細胞、病毒的RNA以及體外轉錄的RNA,均可用于檢測。
2. 制備的RNA必須不含RT-qPCR抑制劑,例如有機溶劑等。
3. 盡量減少RNA樣品的凍融次數,同時(shí)避免RNA酶污染,以減少RNA降解的風(fēng)險。(RNA降解會(huì )極大地限制了RT-qPCR反應的性能)
4. 樣本制備過(guò)程中,注意避免其他DNA的污染,DNA的干擾也會(huì )降低qPCR的準確性。
建議采用商品化的RNA提取試劑盒預先處理待檢物(如拭子、活檢組織、哺乳動(dòng)物細胞和細菌),例如MB廠(chǎng)家的
【RNA小提試劑盒】(英文名:ExtractNow™ RNA Mini Kit,貨號603-1050)
【病毒RNA提取試劑盒】
(英文名:ExtractNow™ Virus RNA Kit, 貨號611-1010/-1050/-1250)

或使用其他已建立的方法。

六、操作注意事項:
該試劑盒應僅由經(jīng)過(guò)培訓的實(shí)驗室人員使用。始終穿上合適的防護服和戴一次性手套。
根據樣品類(lèi)型,應謹慎處理所有樣品。 該試劑盒不含有害物質(zhì)。殘余物可以根據當地法規丟棄。

七、操作步驟
步驟1. 凍干粉ConviFlex™RT-Taq Mix,最大速離心5秒鐘,然后加入260μl復溶緩沖液2×Rehydration Buffer,室溫靜置5分鐘后,渦旋并離心5秒鐘,分裝,待用或-18℃保存。

步驟2.  每個(gè)反應體系為20µl,其中反應mix為15µl。
(1)依據本次試驗樣本數,制備RT-qPCR的反應mix。
1個(gè)反應mix需要:
①ConviFlex™ RT-Taq Mix(即上面復溶的預混液)10µl,
②引物(濃度0.1 - 0.5 µM)
③探針(濃度0.1 - 0.5 µM)
④PCR級水(使每管總體積為15µl)
注:引物和探針的推薦濃度范圍是0.1-0.5 μM。
通常,引物濃度過(guò)高,會(huì )增加引物錯配和非特異RT-PCR產(chǎn)物。然而,當RT-PCR程序運行時(shí)間較長(cháng)或使用簡(jiǎn)并引物時(shí),則推薦引物濃度升高至1 μM。(注意:若使用簡(jiǎn)并引物,同一RT-PCR分析中,引物之間應具有相同的熔解溫度)
(2)將反應mix渦旋并離心5秒鐘。
(3)每個(gè)PCR管中加入15μl反應mix和5μl樣本(抽提后的RNA),
或5μl RNA提取試劑盒中的洗脫緩沖液,作為陰性對照,或5μl PCR級水作為無(wú)模板對照,或5μl陽(yáng)性對照。
(4)扣緊PCR管,然后短暫離心。
(5)將PCR管放置qPCR儀上,蓋好蓋。

步驟3. 在qPCR儀上設置反應程序,
示例:  1 cycle   50 °C for 20 min
1 cycle   95 °C for 10 min
45 cycles 95 °C for 15 sec
60 °C for 1 min
   (以上程序僅依據廠(chǎng)家經(jīng)驗,用戶(hù)可根據實(shí)際情況調整溫度和孵育時(shí)間)

步驟4. 啟動(dòng)程序

八、使用注意事項:
1.使用前應認真閱讀說(shuō)明書(shū)。
2.來(lái)自不同批次的試劑不能混合。
3.試劑盒內的試劑應始終作為一個(gè)整體溶解分裝。
4.試劑盒應在效期內使用。
5.每次PCR至少應設置一個(gè)陽(yáng)性對照。每次PCR至少應設置一個(gè)陰性對照和/或一個(gè)無(wú)模板對照。如果實(shí)驗者自己抽提RNA,則可使用洗脫緩沖液作為陰性對照。對照必須與待測樣品的處理方式相同。您也可能需要其他實(shí)驗室提供的對照品,例如含高、中、低不同濃度的RNA樣品。使用對照,對于確認結果的可靠性或用于排除故障非常有意義。
6.建議在無(wú)RNA和DNA污染的條件下進(jìn)行RT-PCR,以避免操作過(guò)程中DNA或非特異RNA的交叉污染。(MB公司推薦使用PCR污染祛除噴霧,英文名:PCR Clean™,貨號15-2025,預先清潔實(shí)驗環(huán)境。)
7.RNA模板濃度,應依據提取RNA的質(zhì)量、來(lái)源、感興趣基因的相對豐度、以及是否為低拷貝基因,來(lái)調整優(yōu)化。
8.該試劑盒建議逆轉錄步驟的溫度為50°C。但這個(gè)溫度及持續時(shí)間可根據實(shí)驗室自己的分析要求進(jìn)行優(yōu)化,以增強反應的性能。

九、其他相關(guān)試劑

品牌

品名

貨號

規格

德國MB

引物/探針

英文名:SARS-CoV-2 Confirm

271-2100

100次/盒

德國MB

病毒RNA提取試劑盒

英文名:ExtractNow™ Virus RNA Kit

611-1010

10次/盒

611-0050

50次/盒

611-1250

250次/盒

德國MB

拭子病毒提取Kit  

英文名:ExtractNow™ Virus RNA Swab Kit

611-2250

250次/盒

德國MB

PCR污染祛除噴霧

英文名:PCR Clean™

15-2025

250ml/瓶(帶噴嘴)

15-2500

5L/桶(補充裝)

德國MB

PCR污染祛除濕巾

英文名:PCR-Clean™ wipes

15-2001

50抽/筒

15-2002

5×50抽/包

(補充裝)





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